产品货号:
BTN51206
中文名称:
Taq DNA聚合酶
英文名称:
Taq DNA Polymerase,5U/μL
产品规格:
500U
发货周期:
1~3天
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本制品是Thermus aquaticus(水生栖热菌)的DNA聚合酶基因在E.coli中表达而得,具有以双链DNA为模板的5'→3'聚合酶活性和5'→3'外切酶活性。Taq DNA聚合酶长为832个氨基酸,分子量为94kDa。该酶可以广泛用于PCR、RT-PCR、加尾反应等。
- 耐热DNA聚合活性,该酶在90℃以上几乎无DNA合成,在75~80℃时延伸率约150个核苷酸,70℃时为60个核苷酸/秒,55℃时为24个核苷酸/秒。在65~68℃并有Mn2+存在时还具有逆转录活性。
- 热稳定,在PCR混合物中95℃保温40分钟仍可保持50%的活性。
- Mg2+离子依赖性,MgCl2浓度在2.0mM时该酶催化活性最高。
- 本酶无3'→5'外切活性,不具3'→5'校对功能,碱基错配机率为2.1×104。
组分 | 规格 |
Taq DNA聚合酶(5U/μL) | 100μL |
10×PCR Buffer(含Mg2+) | 1mL |
保存:-20℃,有效期1年。
- 按下表配制PCR反应体系:
成分 用量 Taq DNA聚合酶(5U/μL) 0.25μL 10×PCR Buffer(含Mg2+) 5μL 自备dNTP(各2.5mM) 4μL 模板DNA x μL 引物1(20μM) 1μL 引物2(20μM) 1μL 超纯水 至50μL - 50μL反应体系中模板DNA推荐用量如下表:
模板DNA类型 用量 哺乳动物基因组DNA 0.5~1μg 酵母基因组DNA 5~500ng 细菌基因组DNA 0.5~50ng 质粒DNA 5~500pg PCR回收片段 1~100pg
- 50μL反应体系中模板DNA推荐用量如下表:
- 盖上盖子后上机,以λ DNA为模板,扩增1kb的DNA片段的PCR反应条件如下:
过程 温度 时间 PCR反应
(30~35个循环)94℃ 30秒 55℃ 30秒 72℃ 1分 - PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定最佳的反应条件(温度、时间等)。
- PCR扩增得到的产物可用于后续实验,具体方法根据相关流程操作即可。
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